T淋巴细胞亚群(CD3，CD4，CD8)ELISA试剂盒

上海轩泽康生物有限公司为您提供科研elisa试剂盒，种属标本齐全，有zhuan门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒；另有针对各种动物（鼠、兔、山羊、牛、猪、犬、鸡、马、猴、鱼）、植物土壤以及药残类酶联免疫吸附测定试剂盒。

小鼠T淋巴细胞亚群(CD3，CD4，CD8)ELISA试剂盒样品收集、处理方法：

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

关于血清样本注意事项：

大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP未标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异显色。此外还应避免细菌污染，因为菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜时检测。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。

血清的采集、处理以及保存如下:

①    真空采集新鲜血液，加入无菌试管中；

②    采血后室温静置1小时；

③    将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10分钟

④    取上清，分装冻存备用（24小时内检测存于2-8℃；1个月内检测存于-20℃；长期检测可存于-80℃，可放置保存6个月）

样本应避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

注意：我司ELISA试剂盒中每个试剂都有稳定体系的作用，请严格按照说明书操作

小鼠T淋巴细胞亚群(CD3，CD4，CD8)ELISA试剂盒操作步骤：

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

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