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生长激素释放肽ghrelin检测范围多少?

更新时间:2022-08-19 浏览次数:1297

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本人生长激素释放肽ghrelinGHRP-Ghrelin含量

有效期:6个月

保存条件:2-8

上海轩泽康生物有限公司提供

试剂盒组成:

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12×8

12×4

标准品

0.3mL*6

0.3mL*6

生物素标记抗体

6mL

3mL

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1


1. 96T/48T)打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。

2. 标准品浓度依次为:16008004002001000 pg/mL

3. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。

2. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;放置室温,轻摇均匀,待结晶*溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液,未用完的放回4

3. 2洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。


实验原理:

试剂盒采用双抗体步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)捕获抗体包被微孔中,依次加入标本、标准品孵育,加入生物化抗体进行抗体生物素化,经过温育并*后加入HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人生长激素释放肽ghrelinGHRP-Ghrelin呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度

实验所需自备试验器材:

1. 酶标仪(450nm

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3. 37恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水


样本处理及要求:

1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2. 血浆:EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-81000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mLPBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4. 细胞培养物上清:1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

5. 其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测。

6. 样品外观:样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。

7. 样品保存:样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

注意事项:

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。


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地址:上海市金山区吕巷镇璜溪西街88号

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