植物香豆酸3-羟基化酶(C3H)ELISA检测试剂盒

植物香豆酸3-羟基化酶(C3H)ELISA检测试剂盒检测前准备工作：

1.      请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2.      从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结晶溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃

3.      20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被香豆酸-3-羟基化酶（C3H）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的香豆酸-3-羟基化酶（C3H）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

样品收集、处理及保存方法：植物香豆酸3-羟基化酶(C3H)ELISA检测试剂盒

1.  样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2.  标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。

3.  植物萃取液或其它相关样本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测。

（植物处理方案）

1、 新鲜植物组织请在液氮中充分研磨，如无液氮，剪碎，玻璃匀浆器研磨也可；

2、 加入样品体积9倍（鲜重：匀浆液体积）的提取液（0.1mmol PH7.4 PBS ）, 4℃浸提2h；

3、 请于4℃ ，3000rpm，离心10min，收集上清；

4、 取上清检测。

【样本储存】：收集样本必须清楚检测的成份是否足够稳定。对收集后当天检测的标本，储存再4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本分装冻存在-20℃或-80℃。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-80℃可保存6个月。

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