猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ELISA试剂盒

产品简介：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ELISA试剂盒

【产品规格】：96T/盒：zui多可检测90个样本；48T/盒：zui多可检测42个样本

【保存条件】：2-8℃，避光防潮储存

【检测目的】：定性检测

【实验仪器】：酶标仪

【检测方法】：双抗一步夹心法

【待检样本】：组织匀浆、细胞上清液、血清、血浆等

【特色服务】：免费代测ELISA实验、支持定制

实验所需自备试验器材：

1.      酶标仪（450nm）

2.      高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒温箱

4.      蒸馏水或去离子水

96T猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ELISA试剂盒组成及其配置：

①微孔酶标板（ 12 孔×8 条）；

②阴性对照 0.5mL；

③阳性对照 0.5mL；

④检测抗体-HRP 10mL；

⑤20×洗涤缓冲液 25mL；

⑥稀释液 6mL；

⑦底物 A 6mL；

⑧底物 B 6mL；

⑨终止液 6mL；

⑩封板膜 2 张；说明书 1 份；自封袋 1 个.

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操作步骤：

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；

3.  待测样本孔先加待测样本10μL，再加稀释液40μL；

4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断：

 1.  试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；

                阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2.  临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3.  阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4.  阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

操作注意事项：

1.      严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2.      洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3.      消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4.      底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5.      避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.      在储存和温育时避免强光直接照射。

7.      平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.      任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

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