猪柯萨奇病毒Ⅲ型(CoxV III)ELISA试剂盒

检测原理: 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被猪柯萨奇病毒Ⅲ型抗原的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中猪柯萨奇病毒Ⅲ型（CoxV III）的存在与否。

猪柯萨奇病毒Ⅲ型(CoxV III)ELISA试剂盒组成：

结果判断

 1.  试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；

                阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2.  临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3.  阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4.  阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

猪柯萨奇病毒Ⅲ型(CoxV III)ELISA试剂盒性能：

1.  准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。

2.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

4.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

实验注意事项：

1）待检样品要澄清，否则会影响结果。
2）要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。

3）要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头；吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差；用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

4）实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。

5）实验时，要使底物避光保存；底物是光敏感的，要在临用前现配；底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

6）将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

7）温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。温浴时间应遵守试剂盒规定。
8）洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9）洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
10）应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。

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