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ELISA操作前必读——【液体样本处理】

更新时间:2024-02-26 浏览次数:228

可用于ELISA实验的样本一般有血清、血浆、尿液、细胞培养上清液以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法也不同。(由于ELISA只能检测可溶性蛋白质的含量,因此要求样本应清晰透明并离心除去沉淀物或悬浮物质)

液体样本处理原则:所有的液体样本,用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)

【血清样本】:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜,然后 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注意事项:收集血液样本应避免溶血,因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质,这种情况下,ELISA实验中将会出现非特异性显色反应,导致检测结果不准确,出现假阳性结果。另外,样本还应避免细菌污染,因为细菌可能含有内源性HRP,也会导致检测结果不准确。

【血浆样本】:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注意事项:检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书,查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。

【组织匀浆】:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织jian碎。将jian碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

【细胞培养物上清】:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

【尿液、胸腹水、脑脊液】:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

【样品保存】:为确保实验的准确性,样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

【注意事项】:样本中不能含有会抑制HRP活性的NaN3,否则会造成假阴性结果。

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