猪肺炎支原体抗原(MP-Ag)ELISA试剂盒 定性

猪肺炎支原体抗原(MP-Ag)ELISA试剂盒 定性常见样本处理及要求：

【血清样本】：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注意事项：收集血液样本应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，这种情况下，ELISA实验中将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确，出现假阳性结果。另外，样本还应避免细菌污染，因为细菌可能含有内源性HRP，也会导致检测结果不准确。

【血浆样本】：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注意事项：检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书，查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。

【细胞培养物上清】：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

【样品保存】：样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

检测原理：试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被肺炎支原体（MP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUT OFF值相比较，从而判定标本中肺炎支原体抗原（MP-Ag）的存在与否。

猪肺炎支原体抗原(MP-Ag)ELISA试剂盒 定性组成及其配置：

操作步骤：

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；

3.  待测样本孔先加待测样本10μL，再加稀释液40μL；

4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

ELISA试剂盒常见问题解答：

1. 问：96T可以检测多少个样本？48T可以检测多少个样本？

上海轩泽康生物解答：96T ELISA试剂盒可检测90个样本，留6个孔做标准曲线；48T ELISA试剂盒可检测42个样本。

2. 问：能否使用自己的稀释液或者缓冲液？

上海轩泽康生物解答：每个试剂盒中都含有按配方配置的与特异性样品种属相配套的稀释液，以确保待检测的样品被正确稀释。具体请参看说明书

3. 问：ELISA检测试剂盒空白对照是什么意思？

上海轩泽康生物答：不加样本，不加稀释液，不加酶标试剂。其他都可以加。

4. 问：我是按照实验步骤进行测定的但是没有任何信号，这是为什么？

上海轩泽康生物答： 对于使用HRP底物的比色测定，终止液的加入会使底物变色。而说明书推荐的波长就是最适波长。通过轻拍酶标板的边缘充分混合孔内试剂，加入终止液时颜色由蓝变黄。如果加终止液之前孔内试剂没有混合，则底物颜色变绿。也可能加入试剂的顺序错误。加入底物溶液以后不要清洗酶标板，在连续稀释时确定已经加入标准品。如果底物系统中有两个成份必须混合均匀。同时需确保酶标仪的使用和操作正确。确定试剂、标准品、样品都正确配置并按照说明滴加无误。

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