大鼠P选择素(P-Selectin)ELISA检测试剂盒

【产品用途】：本试剂盒仅供科研使用，定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中大鼠P选择素(P-Selectin)的含量。凡订购我司任意一款试剂盒均享受免费代测服务，欢迎咨询、订购！

【P选择素(P-Selectin)简介】：是相对分子质量为140000的糖蛋白，存在于血管内皮细胞的Weibe-l Palade 小体膜上及血小板α颗粒膜上，在受到组织胺、凝血mei、佛波酯和钙离子载体的刺激后，其迅速在质膜上表达， 缺氧/再氧化或氧自由基也可诱导表达。P选择素凝集素样区是配体结合部位的关键序列，其配体是唾液酸化路易斯( S-Lewis x ) , 高亲和力的配体是P选择素糖蛋白配体1( P-selectin glycoproteinlig and 1, PSGL-1) , 主要表达于中性粒细胞和单核细胞。

检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被P选择素（P-Selectin）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P选择素（P-Selectin）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。

大鼠P选择素(P-Selectin)ELISA检测试剂盒组成：（检测范围请参考说明书）

大鼠P选择素(P-Selectin)ELISA检测试剂盒操作步骤:

【试剂盒平衡至室温】：从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

【标准品加样】：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

【加样】：样本孔先加待测样本 10μL，再加稀释液40μL；空白孔不加。除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL

【温育】：用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

【洗涤】：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次（也可用洗板机洗板）。

【显色】：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育15min。

【终止、测定】：每孔加入终止液 50μL，15min 内，在450nm波长处测定各孔的OD 值。

技术小提示：

1.      当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。

2.      为了避免交叉感染，配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。

3.      每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。

4.      混合后的显色底物在上板前应为无色，请避光保存；假如微孔板后，将由物色变成不同深度的蓝色。

5.      终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致；加入终止液后，孔内颜色由蓝变黄；若孔内有绿色，则表明孔内液体未混匀；请充分混合。

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