猪(PRV-gB Ab)ELISA检测试剂盒 定性

猪(PRV-gB Ab)ELISA检测试剂盒 定性组成：

试剂的准备：20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

猪(PRV-gB Ab)ELISA检测试剂盒 定性操作步骤：

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；

3.  待测样本孔先加待测样本10μL，再加稀释液40μL；

4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果判断：

①试验有效性：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00； 阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15。

② 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

③阴性判断：样品 OD 值＜临界值（Cut off），样品为阴性

④阳性判断：样品 OD 值＞临界值（Cut off），样品为阳性

上海轩泽康生物ELISA检测试剂盒常见问题解答：

1.   问：如何选择合适的阳性对照？

上海轩泽物解答：阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致，一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质，加入一定量的待检物质。比如：以人血清为标本的测定，阳性对照多用确定的病人血清或者以覆盖人血浆为原料加入一定量标准品。

2. 问：我能否在实验开始前*收集样品？

上海轩泽物解答：可以。如若收集的样本不能及时进行检测，请保存至-20℃或按照说明书进行保存。应避免反复冻融。

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