大鼠紧密连接蛋白(Occludin)ELISA试剂盒

一．实验前准备要点：

1.     准备各种实验仪器及材料（如：37℃恒温箱，450nm酶标仪、高速离心机、高精度加样器及枪头等等）

2.     按照生物实验室安全防护条例，穿着实验服并佩戴乳胶手套做好防护工作

3.     使用前应将试剂盒内各试剂取出，平衡至室温（至少30分钟）

4.     严格按照说明书的操作方法进行操作。说明书以英文说明书为准。

二. 检测原理: 大鼠紧密连接蛋白(Occludin)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被紧密连接蛋白（Occludin）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的紧密连接蛋白（Occludin）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

三. 样品收集、处理及保存方法：

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

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