科研鸡血红蛋白(Hb)测定试剂盒ELISA

上海轩泽康生物ELISA试剂盒种类繁多，根据产品名称原理大致分为间接法、夹心法、竞争法、捕获包被法（也称为反向间接法，比较少见）。其中各类型试剂盒的基本原理可电询我司业务人员进行详细了解。以下是关于各类型ELISA试剂盒及适用类型：

①间接法：测定总抗体或IgG抗体

②抗体夹心法：测定二价或二价以上大分子抗原

③抗原夹心法：测定抗体

④抗体竞争法：测定抗体

⑤抗原竞争法：测定只有一个抗原决定簇的小分子半抗原

⑥捕获包被法：测定IgM,传染病的早期诊断

检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被血红蛋白（Hb）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血红蛋白（Hb）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂的准备：20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

科研鸡血红蛋白(Hb)测定试剂盒ELISA操作步骤：

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

科研鸡血红蛋白(Hb)测定试剂盒ELISA实验中问题解答：

【检测的结果没有吸光度值或吸光度值很低】

可能造成的原因：1.使用的试剂盒已过有效期 2. 没有充分回温、孵育的温度太低

上海轩泽康生物为您解答：建议更换有效期以内的试剂盒，使用同一批次试剂盒内的内容物并严格按照说明书步骤进行操作。在实验操作的整个过程中仔细观察恒温箱的温度。

【吸光度值偏高】

可能造成的原因：孵育温度过高，反应时间过长。

上海轩泽康生物为您解答：建议调整孵育环境的温度，如无法调整室内温度请将显色时间适当缩短，控制反应时间。

【阴性样本的吸光度值低】

可能造成的原因：酶标板孔中的试剂未充分的混和

上海轩泽康生物为您解答：注意操作的方法，注意洗涤时的方法。

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