鸡玉米赤霉烯酮(ZEN)试剂盒 竞争法ELISA

上海轩泽康生物ELISA试剂盒种类繁多，根据产品名称原理大致分为间接法、夹心法、竞争法、捕获包被法（也称为反向间接法，比较少见）。其中各类型试剂盒的基本原理可电询我司业务人员进行详细了解。以下是关于各类型ELISA试剂盒及适用类型：

间接法：测定总抗体或IgG抗体

抗体夹心法：测定二价或二价以上大分子抗原

抗原夹心法：测定抗体

抗体竞争法：测定抗体

抗原竞争法：测定只有一个抗原决定簇的小分子半抗原

捕获包被法：测定IgM,传染病的早期诊断

检测原理：试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被玉米赤霉烯酮（ZEN）抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的竞争抗原，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的玉米赤霉烯酮（ZEN）呈负相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

花生样本处理方法：样本去壳粉碎，称取5g于100ml具塞三角瓶中，加入25ml 60%甲醇谁溶液和20ml正乙烷振荡10min，滤纸过滤，弃去1/4初滤液，收集其余滤液于125ml分液漏斗中，静置分层后放出下层60%甲醇水提溶液。现提取液2ml，加入2ml超纯水稀释，使提取液甲醇浓度为30%，此为样品代测液。

鸡玉米赤霉烯酮(ZEN)试剂盒 竞争法ELISA组成及试剂配制：

1. 酶标板（Microelisa stripplate）：一块（96孔或者48孔）

2. 标准品（Standard）：0.3ml*6管或者0.3ml*6管

3. 本稀释液（Sample Diluent）：6ml或者3ml

4. 竞争抗原-HRP（HRP-Conjugate reagent）：10ml或者5ml

5. 20x洗涤缓冲液（20X Wash solution）：25ml或者15ml（按说明书进行稀释）

6. 底物A（Chromogen Solution A）：6ml或者3ml

7. 底物B（Chromogen Solution B）：6ml或者3ml

8. 终止液（Stop Solution）：6ml或者3ml

9. 封板膜（Closure plate membrane）：2张

10. 说明书（User manual）：1份

11. 自封袋（Sealed bags）：1个

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、2、4、8、16、32 ng/mL

鸡玉米赤霉烯酮(ZEN)试剂盒 竞争法ELISA结果判断

1.  15分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值；

2.  百分结合率计算：设S0管计数为B0，各标准管或样品管计数为B，非特异管计数为NSB，则百分结合率计算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100%

3.  logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1－B/B0)

4.  将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除，为标准点的百分结合率，在log-logit坐标纸上绘图。

5.  Log-logit双对数标准曲线：坐标纸上横轴从左至右第一个1-9表示为第一个10进位，第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。坐标纸纵轴为百分比（1-99），即各标准吸光值的百分结合率。取一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上，同时剩余的点均匀分布在直线的两边。样品也同样由吸光值计算百分结合率，再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点，此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度，无须换算。

6.  人工处理：以标准浓度取log值为横坐标，对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标，对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线（理想化时是一条直线）。根据待测样

品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。如果使用普通坐标纸，查出的数值应取反对数才是最后的浓度值。

7.  自动处理：使用logit-log或四参数数据处理模式，由电脑自动计算得出结果。

8.  敏感度：0.25 ng/mL

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