谈谈白细胞介素1α（IL-1α）ELISA试剂盒的操作步骤

　　白细胞介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒的操作步骤如下：
 

　　1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
 

　　2、弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl(在使用前一小时内配制)，酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
 

　　3、温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
 

　　4、每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
 

　　5、温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
 

　　6、依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。
 

　　7、依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
 

　　8、用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。